Techniques rapides de clonage d’ADN Présentiel

JOUR 1 : clonage conventionel et par SLIC

• Matin :  
  
  • PCR du fragment à cloner (2 h)
  • Pendant le temps de la PCR, topo sur les différentes techniques de clonage
  • Élimination de la matrice et purification du produit PCR (1 h)
  • Vérification sur gel (30 min)
  • Digestion enzymatique du vecteur et du produit PCR (clonage classique) (30 min)
  • Pause déjeuner pendant la digestion enzymatique (1 h)
• Après midi :
  • Purification des produits digérés (30 min)
  • Vérification sur gel et estimation des quantités (30 min)
  • En parallèle ligation/SLIC : pendant le temps d'incubation de la ligation, réaction SLIC (1 h)
  • Transformation bactérienne (1 h)

JOUR 2 : vérification du clonage et test de vérification des gRNA

• Matin :
  
  • PCR sur ADNg (verif gRNA) et recueil des colonies : culture pour minipreps et PCR sur colonies (3 h)
  • Pendant la PCR : topo/TD étapes et points clés du clonage, conception d'oligos + explication test efficacité gRNA
  • Dénaturation et renaturation test efficacité gRNA (30 min)
  • Pause déjeuner pendant la renaturation (1 h)

• Après midi :
  • Traitement T7 endonucléase (1 h)
  • Minipreps et digestions enzymatiques (pendant le temps d'incubation de la T7 endonucléase) (1 h)
  • Gel de vérification des PCR sur colonies, des minipreps digérées et du test efficacité gRNA (30 min)
  • Interprétation, conclusion et discussion (clonages difficiles, conseils sur cas particuliers…) (1 h)

Cette formation propose une approche théorique et pratique des principales méthodes de clonage en biologie moléculaire. Elle permet aux participants de renforcer leurs compétences en clonage classique et en recombinaison homologue.

• Mettre en œuvre les principales techniques de clonage d'ADN
• Choisir une stratégie adaptée aux projets
• Concevoir des oligonucléotides
• Résoudre les problèmes techniques
• Optimiser les protocoles

Maîtrise des bases de la PCR et du clonage moléculaire.

Il est recommandé aux moins initiés de suivre la formation "De la biologie moléculaire au génie génétique : théorie et pratique" avant de participer à cette formation.

• Ressources pédagogiques : kit pédagogique : livret apprenant au format papier, support théorique au format numérique.
• Équipements :
  • Mis à disposition : matériel standard de laboratoire de biologie nécessaire à  la réalisation des travaux pratiques.

  • À apporter par les apprenants : blouse, calculatrice, ordinateur si possible pour les conceptions d'amorces ou pour résoudre les problèmes rencontrés.